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TCTP-shRNA 重組慢病毒載體的構建及鑒定

2020-09-14 03:16:40 其他

http://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201202-541
目的: 構建TCTP-shRNA重組干擾慢病毒，下調靶細胞內源性TCTP的表達。方法: 通過酶切，連接，轉化，抽提，測序，重組等構建TCTP過表達載體（pEGFP-N1-3FLAG-TCTP-GFP)，共轉染293T細胞篩選RNA干擾有效靶點，并進行RNAi慢病毒大量包裝、濃縮、滴度測定。結果: 成功構建4個TCTP RNAi表達質粒和一個過表達質粒；經外源性篩選獲得一個干擾效果較佳的TCTP RNAi表達質粒，包裝出的重組慢病毒經過濃縮后滴度為3×108 TU/ml。結論:成功構建并篩選出干擾效果較佳的TCTP RNAi表達質粒，并包裝出高滴度重組慢病毒用于后續實驗。

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